U ludzi wczesna biosynteza kortyzolu zapewnia mechanizm zabezpieczający żeński rozwój seksualny cd

Chociaż ten stromy gradient mógł odzwierciedlać różnicowy metabolizm, ekspresja nadnercza dehydrogenazy 11 -hydroksysteroidowej typu 2 (HSD11B2), która inaktywuje kortyzol do kortyzonu, przekroczyła tę we wczesnej nerce (dane nie przedstawione). Zawartość kortyzolu na masę nadnercza zmniejszyła się o około 50% między 8 a 10 wpc (Figura 6A), zgodnie z malejącym profilem ekspresji HSD3B2 (Figura 4). Figura 6 Zawartość kortyzolu i wydzielanie z wczesnej ludzkiej kory nadnerczy. (A) Zawartość kortyzolu (średnia . SEM) na mg tkanki nadnerczy w 8, 9 i 10 wpc, z nerką 8 wpc jako kontrolą. (B) Wydzielanie kortyzolu (średnia . SEM) połączonych nadnerczy stymulowanych przez 10. M forskoliny przy 8, 9 i 10 wpc. (C) Wydzielanie kortyzolu (średnia . SEM) sparowanych nadnerczy przy 8 wpc w odpowiedzi na różne dawki ACTH (1. 24). Analizy statystyczne stymulowanego wydzielania w porównaniu z wydzieliną podstawną osiągnęły ten sam poziom istotności (*** P <0,005) dla każdej dawki ACTH. * P <0,05; ** P <0,02. (D) amplifikacja PCR receptora melanokortyny typu 2 (MC2R) w obecności (+) i nieobecności (.) RT w nadnerczu, jądrze i jajniku przy 8 wpc z konglomeratem GAPDH. Odpowiedź badanych nadnerczy w pierwszym trymestrze na agonistę badano w próbkach męskich i żeńskich za pomocą nocnej hodowli i testu na obecność kortyzolu. Hodowla ex vivo ludzkich komórek kory nadnerczy w połowie ciąży sztucznie wywołała HSD3B2 (3). RT-PCR przed i po hodowli zapewnił, że nie miało to miejsca w naszych eksperymentach (dodatkowa Figura 2). Forskolin, który naśladuje działanie ACTH, stymulował 11-krotny wzrost zawartości kortyzolu nadnerczy przy 8 i 9 wpc w porównaniu z 7,5-krotnie przy 10 wpc (dane nie przedstawione). Bardzo podobne wyniki uzyskano z pożywki, wykazując znacznie zmniejszone wydzielanie kortyzolu przy 10 wpc (Figura 6B). Te dane określają maksymalną produkcję kortyzolu na poziomie 8. 9 wpc, gdy nadnercze również reaguje na ACTH (Figura 6C) i ekspresjonuje swój receptor, receptor typu melanokortyny typu 2 (MC2R, Figura 6D). Podsumowując, eksperymenty te potwierdziły biosyntezę kortyzolu reagującą na ACTH przez wczesną ludzką kory nadnerczy. Użyliśmy tej samej kolekcji płodu, aby zapytać, czy istnieje zbieżna dojrzałość kortykotropów przedniego przysadka mózgowego do wydzielania ACTH. Rozwijająca się przysadka była ujemna pod względem immunoreaktywności ACTH przy 41 dpc (dane nie przedstawione). Jednak identyczny z początkiem ekspresji enzymu korowo-adrenergicznego wykryto cytoplazmatyczny ACTH przy 50-52 dpc (Figura 7B), który pokrywał się z bardziej rozpowszechnioną ekspresją jądrowego receptora glukokortykoidowego (GR, Fig. 7C, należy zauważyć, że badania kolokalizacji nie były możliwe jako oba przeciwciała były hodowane na myszach). Zwiększoną ekspresję ACTH wykryto w przedniej części przysadki przy 8 wpc (Figura 7D), z podobnymi ustaleniami przy 10 wpc (dane nie pokazane). Całonocna hodowla in vitro przy 8 wpc wykazała, że te wczesne kortykotrofy wydzielały obfity ACTH, który był tłumiony przez deksametazon (Tabela 1). Ryc. 7 Ludzki rozwój przedniego odcinka przysadki. (A) Sekcja strzałkowa z głowy przy 50 dpc. Symbol funta oznacza jamę ustną. (B) D) Jasne pole IHC z przeciwciałami przeciwko ACTH (B i D) i GR (C) wybarwione kontrastowo błękitem toluidyny. B i C pokazują widoki o większym powiększeniu obszaru pudełkowego w A. Strzałki pokazują zachodzące na siebie profile ekspresji cytoplazmatycznego ACTH i jądrowej GR w sąsiadujących sekcjach. (D) Przednia przysadka przy 8 wpc. bs, kość basosphenoidalna; h, rozwijający się podwzgórze; rp, worek Rathkego; t, język. Pręty skali: 500 .m (A), 100 .m (B i C), 200 .m (D). Tabela 1Rozwiązanie ACTH in vitro z przedniego płata przysadki przy 8 wpc Na koniec, wraz z wystąpieniem większego zróżnicowania zewnętrznych narządów płciowych przy 8 wpc (ryc. 8), określiliśmy zdolność nadnerczy płodu do wydzielania androgenów. Androstendion i testosteron badano na podłożach par nadnerczy hodowanych przez noc w obecności lub nieobecności ACTH, forskoliny lub deksametazonu. Deksametazon nie zdołał znacząco zmienić androstendionu i sekrecji testosteronu, z których oba były stymulowane około 3-krotnie w męskich i żeńskich gruczołach nadnerczy przez forskolin i, w mniejszym stopniu, ACTH (tabela 2). Przeciwnie, ani kokultura stymulowana ACTH nadnerczy z jądrowym jądrem lub jajnikiem, ani stymulacja ACTH samego gonadu nie zwiększyła produkcji androgenu (dane nie pokazane). Konwersja androstendionu do testosteronu opierała się na aktywności dehydrogenazy 173-hydroksysteroidowej (HSD17B). Przez RT-PCR izoformę typu 3, HSD17B3, odpowiedzialną za biosyntezę testosteronu w jądrze, wykryto jedynie bardzo słabo w korze nadnerczy pierwszego trymestru (ryc. 8C) [więcej w: orbita rybnik, mastermed białystok, pbr wyrzysk ]