U ludzi wczesna biosynteza kortyzolu zapewnia mechanizm zabezpieczający żeński rozwój seksualny ad

W 41 dpc CD34-dodatnie kanały naczyniowe penetrowały zarodkowy gruczoł między aortą i mezenephros, a gęstość naczyń później zwiększyła się na obwodzie kory nadnerczy (Figura 2, C i D). Figura 2. Wzrost i rozwój naczyń krwionośnych nadnercza człowieka wcześnie płodu. (A) Względna proporcja nadnerczy (ADR) do nerki (KID) we wczesnym okresie rozwoju. (B) Waga (. SEM) poszczególnych nadnerczy i wieku rozwojowego. (C i D) Brightfield IHC z anty-CD34 dla zademonstrowania rozwoju naczyniowego zabarwionego kontrastowo błękitem toluidyny w 41 (C) i 50 (D) dpc. Sąsiednią sekcję H & E pokazano po lewej stronie C. ac, kory nadnerczy; ao, aorta; c, kapsułka; mg, kłębuszek nerkowy. Pręty skali: mm (A), 300 .m (C i D). Nie określono dokładnego początku czynności kory nadnerczy, ani poprzez wydzielanie steroidu, ani profil ekspresji enzymów biosyntetycznych (ryc. 1). Na podstawie analizy immunohistochemicznej (IHC), jak pokazano na ryc. 3, ostre białko regulatorowe steroidów (StAR), CYP11A, CYP17 i CYP21 po raz pierwszy wykryto silnie przy 50. 52 dpc w powstającej wewnętrznej strefie płodowej (Figura 3, B, G, L, i Q). Immunoreaktywność w tej lokalizacji wykrywano również przy użyciu przeciwciała, które rozpoznaje zarówno CYP11B1 i CYP11B2 (Figura 3V). Stosując specyficzne startery i sekwencjonowanie, produkty amplifikacji RT-PCR z transkryptów CYP11B1 i CYP11B2 (dane nie pokazane). Wewnątrz zewnętrznej strefy ostatecznej, StAR, CYP11A, CYP21 i CYP11B1 / CYP11B2 były słabiej wykrywane i, zgodnie z naszymi poprzednimi badaniami, CYP17 wydawał się w dużej mierze nieobecny (rysunek 3L) (10). W późniejszych okazach do 14 wpc profile te utrzymywały się w strefie płodowej; jednak strefa ostateczna również zabarwiła się słabo pozytywnie dla CYP17 (ryc. 3, M, N i O). Ryc. 3. Enzym semiotoidogenny i ekspresja StAR w rozwijającym się nadnerczu ludzkim. IHC Brightfielda w sekwencyjnym wieku rozwojowym zabarwionym kontrastowo błękitem toluidynowym z przeciwciałami przeciwko StAR (A. E), CYP11A (F. J), CYP17 (K. O), CYP21 (P. T) i CYP11B1 / CYP11B2 (U. Y) . Kropkowany pierścień w A ilustruje zakres kory nadnerczy w lewych panelach (A, F, K, P i U). Na innych obrazach strefa ostateczna (DZ) jest zorientowana w lewo, a strefa płodu (FZ) w prawo. W 14 wpc te 2 strefy zostały oddzielone dodatkową strefą przejściową (TZ). Pasek skali: 300 .m. W przypadku biosyntezy kortyzolu de novo z cholesterolu konieczna jest ekspresja HSD3B2 (rysunek 1). We wszystkich poprzednich badaniach ograniczonych do późniejszego materiału, białko to zostało wykryte rzetelnie po 22 tygodniach. ciąża (3, 5), gdzie jest regulowana sierocym receptorem jądrowym NGFI-B (8). Podobnie jak inne enzymy korowo-adrenerkowe, immunoreaktywność HSD3B była nieobecna przy 41 dpc; jednak zaskakujące, że dodatnie komórki były widoczne przy 50. 52 dpc, głównie na granicy między strefami ostatecznymi i płodowymi (Figura 4, A i B). Ekspresja była szczególnie obfita i bardziej rozpowszechniona w próbkach przy 8. 9 wpc, z wieloma komórkami wykazującymi immunoreaktywność HSD3B, które zmniejszyły się w późniejszych punktach czasowych do momentu, gdy nie wykryto żadnego białka przy 14 wpc (Figura 4, C. F). IHC dla NGFI-B na sąsiednich skrawkach ujawniło niezwykle podobny profil ekspresji jądrowej (pierwotne przeciwciała przeciwko HSD3B i NGFI-B były podniesione u królika, zabraniając badań kolokalizacyjnych; Figura 4, G (L)). Figura 4HSD3B i immunoreaktywność NGFI-B w rozwijającym się nadnerczu ludzkim. Jasne pole IHC z przeciwciałami przeciwko HSD3B (A (3F) i NGFI-B (G . L) wybarwione błękitem toluidyny. Kropkowane pierścienie w A i G ilustrują wielkość kory nadnerczy. Na innych obrazach strefa ostateczna jest zorientowana w lewo, a strefa płodu w prawo. Pasek skali: 300 .m. We wszystkich eksperymentach IHC ekspresja była nieodróżnialna między okazami męskimi i żeńskimi. Dane były również wspierane przez sekwencjonowane produkty RT-PCR dla izoform StAR, CYP11A, CYP17, CYP21 i HSD3B przy użyciu starterów dopasowujących intron (Figura 5A). Immunoreaktywność HSD3B korelowała wyłącznie z ekspresją izoformy typu 2 HSD3B2 (Figura 5B). Figura 5 Analiza RTR enzymów korowo-korowych i StAR przy 8 wpc. (A) RT, a następnie 22 i 28 cykli PCR dla transkryptów kodujących enzymy steroidogenne. (B) Specyficzna identyfikacja izoform HSD3B2 i HSD3B1 w obecności (+) i nieobecności (a) RT. Nie wykryto transkryptu HSD3B1 w próbce nadnerczy po 42 cyklach PCR. Kontrolami dodatnimi były jądro płodu (HSD3B2) i skóra (HSD3B1); negatywne kontrole stanowiły H2O i genomowe DNA (G). Nasze odkrycia dotyczące ekspresji enzymów przewidują biosyntezę kortyzolu. W porównaniu z nerkami, testy immunologiczne dla kortyzolu, potwierdzone przez chromatografię gazową / spektrometrię masową (Metody dodatkowe i uzupełniająca figura 1, materiał uzupełniający dostępny online z tym artykułem; doi: 10.1172 / JCI25091DS1), ujawniły 9 do 18 razy większą zawartość kortyzolu w surowicy. nadnercza w pierwszym trymestrze ciąży (ryc. 6A)
[więcej w: wegarnik zielona góra, bs paslek, bóle brzucha icd 10 ]