Przeciwciało superagonistyczne CD28 wywołuje 2 funkcjonalnie różne fale aktywacji komórek T u szczurów ad

Aby przeanalizować wpływ JJ316 na zachowanie bazujące na limfocytach, wstrzyknęliśmy mg, 0,2 mg i 0,04 mg superinte- wannego przeciwciała CD28 i ustalono względne częstotliwości głównych subpopulacji leukocytów we krwi w ciągu 72 godzin. Przy najwyższej dawce przeciwciała liczba limfocytów T spadła z około 40% do poziomu niemal niewykrywalnego w ciągu 4 godzin (Figura 1A). Równocześnie częstotliwość komórek B została nieznacznie zmniejszona, a odsetek granulocytów silnie zwiększony (Figura 1A i dane niepokazane). Ciężka limfopenia T utrzymywała się przez 24 godziny, a następnie powoli powracała do pierwotnego poziomu (Figura 1A). Wpływ JJ316 był zależny od dawki, ale nawet przy stężeniu 0,04 mg przeciwciało było nadal znacząco skuteczne (Figura 1A). Figura Zastosowanie JJ316 indukuje limfopenię T i prowadzi do redystrybucji limfocytów T CD4 +. (A) Próbki krwi od szczurów dożylnie wstrzykniętych 1,0 mg, 0,2 mg lub 0,04 mg JJ316 pobrano we wskazanych punktach czasowych i analizowano pod względem odsetka krążących komórek T (lewy panel) i granulocytów (prawy panel) za pomocą cytometrii przepływowej. n = 6; oznaczać . standardowy błąd średniej. Analiza statystyczna odnosi się do indywidualnego porównania każdego przebiegu z nieleczonymi szczurami kontrolnymi za pomocą 1-drogowej ANOVA. (B) Leukocyty izolowano z węzłów chłonnych, śledziony, płuc i wątroby 10 i 72 godziny po wstrzyknięciu 1,0 mg JJ316 lub PBS jako kontrolę. Następnie całkowitą liczbę limfocytów T CD4 + określono przez zliczenie mikroskopowe, a następnie analizę metodą cytometrii przepływowej CD4 i TCR. wyrażenie. n = 3; oznaczać . standardowy błąd średniej. (C) Względne częstości nieczynnego CD4 + (CD45RC + RT6.1 +), aktywowane (CD45RCyRT6.1a) i komórki T pamięci (CD45RCaRT6.1 + / CD45RC + RT6.1a) określono 10 i 72 godziny po podaniu JJ316 lub PBS. Thy-1 + RTE (niedawni emigranci zagłady) zostali wyłączeni z analizy. n = 3; oznaczać . standardowy błąd średniej. (D) Limfocyty znakowane CFSE (4 x 107) przeniesiono do biorcy szczurów iv, a 3 dni później podano 0,2 mg JJ316 lub PBS. Po 10 godzinach oznaczono częstości komórek T CFSE + CD4 + w krwi, wątrobie, płucach i śledzionie za pomocą mikroskopowego zliczania i cytometrii przepływowej. n = 3; oznaczać . standardowy błąd średniej. * P <0,05; ** P <0,01; *** P <0,001. Następnie określiliśmy bezwzględną liczbę subpopulacji limfocytów w śledzionie, węzłach chłonnych, płucach i wątrobie. Obfitość limfocytów T CD4 + we wtórnych narządach limfoidalnych była zasadniczo niezmieniona 10 godzin po wstrzyknięciu przeciwciała superagonistycznego CD28, tj. W czasie, gdy limfocyty T stały się praktycznie niewykrywalne w krwi obwodowej (Figura 1B). Przeciwnie, liczba limfocytów T CD4 + w płucach i wątrobie była znacząco zmniejszona odpowiednio o 95% i 80% (Figura 1B). Co ważne, liczba komórek B nie zmieniła się w żadnym z tych narządów (dane nie pokazane). Wydaje się, że limfopenia T indukowana przez JJ316 nie jest konsekwencją redystrybucji komórek do narządów poza limfatycznych, ale raczej wydaje się, że limfocyty T są selektywnie zatrzymywane w węzłach chłonnych i śledzionie. Zgodnie z zaleceniami, JJ316 nie indukował fenotypu pamięci w limfocytach T CD4 + w oparciu o klasyfikację O. Sullivan et al. (14, 15). Analiza cytometrii przepływowej, wykorzystująca przeciwciała przeciwko Thy-1, CD45RC i RT6.1, ujawniła niezmienione częstotliwości naiwnych, aktywowanych i pamięci komórek T w węzłach chłonnych po 10 godzinach, co sugeruje, że przeciwciała superagonistyczne CD28 zasadniczo nie wpływają na tożsamość komórek T (Figura 1C). Wcześniej podawano, że wlew JJ316 indukuje odpowiedź proliferacyjną limfocytów T w późniejszych punktach czasowych (11). W związku z tym zaobserwowaliśmy silnie zwiększoną liczbę komórek T CD4 + 72 godziny po zastosowaniu JJ316 we wszystkich analizowanych narządach (Figura 1B). Równocześnie zwiększono względne częstotliwości aktywowanych i pamięci komórek T, co sugeruje, że odpowiedź proliferacyjna preferencyjnie dotyczy dojrzałych populacji komórek T (Figura 1C). Aby potwierdzić pułapkowanie limfocytów T w drugorzędowych narządach limfoidalnych, przyjęliśmy limfocyty znakowane CFSE do szczurów typu dzikiego i zbadaliśmy ich redystrybucję po iniekcji JJ316. W ciągu 10 godzin częstotliwość limfocytów T CFSE + CD4 + została znacznie zmniejszona we krwi, wątrobie i płucach, podczas gdy ich komórkowość w śledzionie pozostała niezmieniona (Figura 1D). Tak więc przeciwciała superagonistyczne CD28 prowadzą do redystrybucji limfocytów T z obwodu do wtórnych narządów limfatycznych. JJ316 prawie natychmiast unieważnia ruchliwość komórek T w wtórnych narządach limfoidalnych żywych zwierząt [więcej w: firany na metry allegro, nerwiak mortona leczenie, babyliss allegro ]