Odwrócenie utraty aksonów i niepełnosprawności w mysim modelu postępującej stwardnienia rozsianego czesc 4

Przebadaliśmy także mózg i stwierdziliśmy okołonaczyniowy stan zapalny, jak zaobserwowano w nawracających modelach EAE (patrz Suplementowa Figura 3, materiał uzupełniający dostępny online w tym artykule; doi: 10.1172 / JCI33464DS1), który był mniejszy niż obserwowany w rdzeniu kręgowym. Skoncentrowano naszą analizę patologiczną na odcinku lędźwiowym rdzenia kręgowego, ponieważ choroba kliniczna w modelu NOD (która ogranicza się do ogona i kończyn tylnych) wiąże się z widoczną utratą aksonów w rdzeniu kręgowym, ale nie w mózgu. Rycina 2 Leczenie ABSulsem ABS-75 zmniejsza utratę aksonów i demielinizację w wtórnie postępującym EAE. (A) Impregnat srebrzysty dla aksonów Bielschowsky ego wykazał zmniejszenie gęstości aksonów w istocie białej rdzenia kręgowego (strzałki) myszy leczonej podłożem w porównaniu ze zwierzęciem leczonym ABS-75 .. Analizę patologii aksonów przeprowadzono po progresji choroby pod koniec przebiegu choroby. Oryginalne powiększenie, × 50 (górne panele); × 100 (dolne panele). Ocena ilościowa wybarwionych odcinków rdzenia kręgowego metodą analizy obrazu (ImageJ; NIH) potwierdziła zmniejszenie utraty aksonów podczas porównywania ABS-75. i zwierzęta traktowane nośnikiem. P <0,02; Test ucznia, co. SD. (B) Szybkie barwienie Luxol wykazało zmniejszenie zawartości mieliny w istocie białej rdzenia kręgowego (strzałki) myszy traktowanych podłożem w porównaniu ze zwierzętami traktowanymi ABS-75p. Oryginalne powiększenie, × 50 (górne panele); × 100 (dolne panele). Kwantyfikacja zabarwionych odcinków rdzenia kręgowego wykazała zmniejszenie demielinizacji przy porównywaniu ABS-75. i zwierzęta traktowane nośnikiem. P <0,01. Test ucznia, co. SD. (C) Barwienie Neurofilamentu H, które identyfikuje mniejsze włókna nerwowe (przedstawione na czerwono, białe strzałki) pokazuje zmniejszenie gęstości włókien nerwowych (procent obszaru w obrębie brzusznej kolumny istoty białej zabarwionej na włóknisty nerwu H) w kontrolach (3,96%. 1,43%) w porównaniu z ABS-75 (16,13%. 5,13%). P <0,01; Test ucznia, co. SD. Jądra komórek infiltrujących barwiono na niebiesko (żółte strzałki), a GFAP barwiono na zielono. Oryginalne powiększenie, × 400. (D) Srebrne impregnaty Bielschowsky ego dla aksonów nie wykazały znaczącego zmniejszenia gęstości aksonów w istocie białej rdzenia kręgowego myszy SJL na końcu przebiegu choroby w porównaniu z nie naiwnymi zwierzętami. Oryginalne powiększenie, × 100. Następnie ocenialiśmy utratę aksonów w tradycyjnym modelu myszy z rzutowo-remisyjnym SJL. W przeciwieństwie do progresywnego modelu NOD, nie zaobserwowaliśmy znaczącej utraty aksonów w rdzeniu kręgowym zwierząt SJL pod koniec przebiegu choroby (Figura 2D) i nie było efektu leczenia fulerenem ABS-75 (dane nie przedstawione). Wyniki te pokazują, że progresywny model NOD jest wyjątkowy zarówno klinicznie jak i patologicznie w porównaniu z tradycyjnymi rzutowo-remisyjnymi modelami EAE. Leczenie fulerenem ABS-75 blokuje stres oksydacyjny i zmniejsza infiltrację CD11b do istoty białej rdzenia kręgowego w przewlekłym postępującym EAE. Już wcześniej informowano, że pochodne fulerenu były zdolne do hamowania aktywności iNOS makrofagów (39). Ponadto badania wykazały, że fuleren zwiększa aktywność SOD w mikrogleju traktowanym LPS (40). Ponieważ uważa się, że stres oksydacyjny wywołany przez zapalenie bierze udział w neurodegeneracyjnym składniku progresywnego EAE, zapytaliśmy, czy fuleren ABS-75 będzie zakłócał wytwarzanie NO przez aktywowane mikrogleje, co może przynajmniej częściowo wyjaśnić jego zdolność do zmniejszania postępu choroby. Aby rozwiązać ten problem, stymulowaliśmy mysią mikroglejową linię komórkową z peptydoglikanem (ligand TLR2) plus IFN-y. w obecności lub nieobecności fulerenu ABS-75. Jak pokazano na uzupełniającej figurze 1, fuleren ABS-75 in vitro nie wpływał na wytwarzanie mikropialowego NO wytwarzanego przez TLR2. Jednak leczenie fulerenem ABS-75 zapoczątkowane po wystąpieniu choroby zatrzymało infekcję CD11b w istocie białej rdzenia kręgowego w EAE. Barwienie hematoksyliną i eozyną na odcinkach rdzenia kręgowego od myszy NOD, a następnie EAE przez 70 dni ujawniło intensywny naciek zapalny związany z postępem choroby. Aby zidentyfikować komórki zawierające naciek, wybarwiono dla różnych markerów i znaleziono dużą liczbę komórek CD11b + infiltrujących białą substancję zwierząt traktowanych podłożem (Figura 3A). Co ciekawe, tylko bardzo niewiele komórek T CD3 + obserwowano w rdzeniu kręgowym zwierząt z przewlekłym postępującym EAE (dane nie pokazane). Jak pokazano na Figurze 3A, liczba komórek CD11b dramatycznie zmniejszyła się w rdzeniu kręgowym myszy traktowanych fulerenem ABS-75a. Ponieważ infiltrujące komórki CD11b mogą być ważnym źródłem cząsteczek powodujących uszkodzenia oksydacyjne podczas postępującego EAE, przeprowadziliśmy barwienie dla nitrowanych białek, aby zbadać, czy zmniejszenie infiltracji CD11b u myszy leczonych fulerenami było związane z mniejszym uszkodzeniem oksydacyjnym [podobne: zsr kijany, bóle brzucha icd 10, ból brzucha we wczesnej ciąży ]