Odwrócenie utraty aksonów i niepełnosprawności w mysim modelu postępującej stwardnienia rozsianego ad 7

Wyniki te wskazują, że w przeciwieństwie do MK801, fuleren ABS-75 nie upośledza funkcji pamięci mierzonej w modelu zwierzęcym. Fullerene ABS-75 ratuje astrocytarną zdolność buforowania glutaminianu poprzez odwracanie zmniejszonej ekspresji syntetazy glutaminowej i transportera glutaminianu w stanach zapalnych. Ponieważ glutaminian uwalniany w szczelinach synaptycznych jest wychwytywany przez astrocyty, a następnie przekształcany w nietoksyczną glutaminę przez specyficzny dla glejnika enzym syntetazę glutaminową (GS), uważa się, że astrocyty są ważnymi komórkami, które utrzymują zewnątrzkomórkowe stężenia glutaminianu w OUN, a przez to unikają neurotoksyczności (53, 54). Wykazano, że wzmacniając iNOS, bodziec zapalny prowadzi do zmniejszenia aktywności GS (55), co może przyczyniać się do niezrównoważonego metabolizmu glutaminianu i uszkodzenia aksonów w przewlekłych chorobach zapalnych, takich jak MS. Skompromowaną aktywność GS w astrocytach wykazano w EAE (56). Sygnalizacja receptora NMDA jest również związana ze zmniejszoną aktywnością GS w astrocytach (57). Zmniejszona ekspresja transporterów glutaminianu, takich jak EAAT1, również przyczynia się do obniżenia zdolności do buforowania glutaminianu astrocytów w warunkach stanu zapalnego. Rzeczywiście, wykazano, że poprzez uwalnianie TNF-a, autoreaktywne komórki T zmniejszają ekspresję EAAT1 i wychwyt glutaminianu w astrocytach (58). Ponieważ fuleren ABS-75 ma potencjał, by ugasić wolne rodniki, takie jak NO i blokować receptory NMDA, badaliśmy, czy może on utrzymać zdolność buforowania glutaminianu astrocytów w stanach zapalnych. Pierwotne astrocyty mysie poddano prowokacji TNF-a (50 ng / ml) lub LPS (1 ug / ml) i IFN-y (200 U / ml) przez 24 godziny w obecności lub nieobecności ABS-75 (1. M) lub MK801 (1. M). Ekspresję GS i EAAT1 oceniano metodą western blot. Jak pokazano na Fig. 5A, fuleren ABS-75 odwrócił zmniejszoną ekspresję zarówno EAAT1, jak i GS, która występuje w warunkach stanu zapalnego, a zatem utrzymuje zdolność buforowania glutaminianu astrocytów. Figura 5Flerenol ABS-75 ratuje zmniejszoną ekspresję EAAT1 i GS, która występuje w astrocytach w warunkach zapalnych. (A) Pierwotne astrocyty myszy stymulowano TNF-a (50 ng / ml) lub LPS (1 ug / ml) i IFN-y (200 U / ml) przez 24 godziny pod nieobecność lub obecność ABS-75 (1. M) lub MK801 (1. M). Ekspresję GS i EAAT1 oceniano metodą western blot. Oznaczenie ilościowe przeprowadzono za pomocą analizy densytometrycznej (ImageJ; NIH) dla 2 niezależnych eksperymentów. Stwierdziliśmy, że zarówno ABS-75, jak i MK801 mogą odwracać zmniejszoną ekspresję EAAT1 i GS przez astrocyty w warunkach zapalnych. P <0,01, ANOVA, a następnie test post-hoc, czyli. SD. (B) Badanie immunohistochemiczne przeprowadzone na odcinkach rdzenia kręgowego analizowanych po progresji choroby ujawniło zwiększoną ekspresję GS w istocie białej fulerenowej grupy ABS-75 w porównaniu ze zwierzętami leczonymi podłożem. Kwantyfikacja przez ImageJ potwierdziła zwiększoną liczbę komórek glejowych wyrażających GS w istocie białej myszy traktowanych fulerenem ABS-75a. P <0,05, test. Student. SD. (C) Badanie immunohistochemiczne przeprowadzone na odcinkach rdzenia kręgowego analizowanych po progresji choroby ujawniło, że komórki eksprymujące GS w obrębie istoty białej były albo oligodendrocytami (CNP-dodatnie) albo astrocytami (GFAP-dodatnie). Oryginalne powiększenie, × 200 (B); × 630 (C). Ponieważ leczenie fulerenem ABS-75 zapoczątkowane po wystąpieniu choroby było w stanie zablokować infiltrację CD11b i uszkodzenie oksydacyjne w rdzeniu kręgowym myszy EAE, zapytaliśmy, czy leczenie to również zapobiegałoby zmniejszeniu ekspresji GS przez komórki glejowe po progresji choroby. Badania immunohistochemiczne przeprowadzone na odcinkach rdzenia kręgowego analizowanych po progresji choroby wykazały zmniejszoną ekspresję GS przez komórki glejowe w istocie białej w grupie kontrolnej w porównaniu ze zwierzętami leczonymi fulerenami (Figura 5B). Podwójne barwienie dowiodło ekspresji GS w obu oligodendrocytach (CNP-pozytywu) i astrocytach (GFAP-pozytywny) (Figura 5C). Zwiększona częstotliwość komórek wykazujących ekspresję GS była taka sama dla obu oligodendrocytów i astrocytów. Leczenie Fullerene ABS-75 nie wpływa na adaptacyjne odpowiedzi komórek T i B. W celu ustalenia, czy leczenie fullerenem ABS-75 wpływa na odpowiedzi immunologiczne, najpierw porównaliśmy antygenowo specyficzne odpowiedzi komórek T zwierząt traktowanych ABS-75f z nośnikiem i fulerenem na końcu przebiegu choroby. Jak pokazano na Figurze 6, Ap, nie było różnicy w proliferacji komórek T lub wytwarzaniu cytokin (IFN-a i IL-2) po stymulacji specyficznej dla antygenu między grupami traktowanymi nośnikiem i fulerenem. [więcej w: zsr kijany, nemak bielsko, europol wągrowiec ]