Odwrócenie utraty aksonów i niepełnosprawności w mysim modelu postępującej stwardnienia rozsianego ad 6

Uszkodzenie neuronów indukowane przez NMDA indukuje ekspresję CCL2 przez astrocyty w organotypowych hodowlach mózgu (46, 47). Ponieważ fuleren ABS-75 zawiera cząstkę znaną jako antagonistę receptora NMDA, zapytaliśmy, czy byłaby w stanie chronić neurony przed uszkodzeniem wywołanym przez glutaminian i H2O2. Aby odpowiedzieć na to pytanie, szczurze neurony korowe prowokowano 60. M H2O2 lub 50. M glutaminianem przez 24 godziny pod nieobecność lub obecność ABS-75 (1. M) lub MK801 (1. M). Uszkodzenie wywołane glutaminianem i H2O2 oceniano przez barwienie MAP-2 i aktywność dehydrogenazy mleczanowej (LDH) jako wskaźnik żywotności komórek. MK801, który jest antagonistą receptora NMDA o znanych właściwościach neuroprotekcyjnych (12,48), zastosowano jako kontrolę pozytywną. Jak pokazano na rysunku 4, A i B, stwierdziliśmy, że fuleren ABS-75 ma właściwości neuroochronne i hamuje ekscytotoksyczność glutaminianu. Tak więc, po prowokacji glutaminianem (50 .M) i H2O2 (60 .M), zaobserwowaliśmy więcej barwienia MAP-2 (Figura 4A) i niższą aktywność LDH (Figura 4B) w hodowlach neuronalnych potraktowanych fulerenem ABS-75 w porównaniu z kontrola. Rycina 4Flerenol ABS-75 chroni neurony przed uszkodzeniami oksydacyjnymi i obrażeniami wywołanymi przez glutaminian zależne od NMDA, ale nie zaburza funkcji pamięci myszy. Kule neuronów szczurów (11 DIV) poddano prowokacji 60. M H2O2 lub 50. M glutaminianem przez 24 godziny pod nieobecność lub obecność ABS-75 (1. M) lub MK801 (1. M). Obrażenia wywołane glutaminą i H2O2 oceniano przez barwienie (A) MAP-2 i aktywność (B) LDH. Wyniki wykazały zmniejszone uszkodzenie neuronów w fulerenach ABS-75. i kultury traktowane MK801. P <0,01, kontrola w porównaniu z ABS-75 i MK801 i ABS-75 w stosunku do MK801. P <0,01, kontrola w porównaniu z ABS-75 i kontrola w stosunku do MK801 (uszkodzenie wywołane H2O2). ANOVA, a następnie test post-hoc, co. SD. (C) Wpływ Fullerene ABS-75 i MK801 na funkcję pamięci oceniano na urządzeniu z dodatkowym labiryntem. Pierwszego dnia (próba nabycia) zwierzęta umieszczono na krawędzi otwartego ramienia i zarejestrowano opóźnienie pierwszego wejścia w obszarze centralnym. Drugiego dnia (test retencyjny) wszystkie zwierzęta powróciły na arenę i odnotowano opóźnienie pierwszego przeniesienia na obszar centralny. Leki podawano ip 30 min przed badaniem retencji. Wszystkie zwierzęta przeniosły się do centralnego obszaru w próbie nabycia. W badaniu retencji tylko zwierzęta traktowane 0,15 mg / kg MK801 miały wyniki podobne do tych u myszy nośnych w próbie nabycia. Zwierzęta leczone PBS, 2% DMSO lub ABS-75 dotarły do obszaru centralnego szybciej w badaniu retencyjnym niż w próbie akwizycji, wskazując, że w przeciwieństwie do MK801, fuleren ABS-75 nie upośledza funkcji pamięci. P <0,05, test Kruskala-Wallisa, a następnie test wielokrotnych porównań Dunna. n = 10 zwierząt na grupę. Mediana (linia przez każde pole). Pokazane są SD (paski błędów). Oryginalne powiększenie, × 130. Fullerene ABS-75 nie upośledza funkcji pamięci. U ludzi stwierdzono, że antagoniści receptora NMDA wywołują działania niepożądane, takie jak senność, omamy, psychoza, upośledzenie pamięci i wymioty (49, 50). U zwierząt blokowaniu receptora NMDA przez MK801 towarzyszy również zaburzenie pamięci i uczenia się (51, 52). Skutki uboczne blokady glutaminergicznej spowodowały przerwanie niektórych badań klinicznych z udarem mózgu. Nie zaobserwowaliśmy żadnych widocznych efektów toksycznych ani zmian behawioralnych u naszych zwierząt, nawet po ich leczeniu przez ponad 40 dni. Aby bezpośrednio zaadresować funkcję pamięci, przeprowadziliśmy eksperymenty behawioralne na zwierzętach traktowanych ABS-75p w porównaniu z myszami traktowanymi MK801. W przypadku tych eksperymentów każdą mysz umieszczono na końcu otwartego ramienia zwróconego w kierunku od centralnej platformy urządzenia z dodatkowym labiryntem. Opóźnienie transferu, tj. Czas, w którym każda mysz wzięła ruch z otwartego ramienia do zamkniętego ramienia, zmierzono w dniu 1, i to było próbą nabycia. W dniu 2, który był testem retencji, zwierzętom wstrzyknięto albo PBS, 2% DMSO, MK801 (150 .g / kg), albo fuleren ABS-75 (30 .g / kg) i po 30 minutach testowano na funkcję pamięci mierzone czasem opóźnienia transferu. Jak pokazano na figurze 4C, czasy opóźnienia transferu obserwowane u myszy traktowanych PBS i DMSO znacząco zmniejszyły się, porównując próby akwizycji i retencji, wskazując, że zwierzęta pamiętają, jak uciec przed nieprzyjemną sytuacją, którą stanowi otwarte ramię. Zwierzęta otrzymujące fuleren ABS-75 również wykazywały mniejszy czas oczekiwania na trans- fer przez próby, a zatem nie różniły się od myszy traktowanych PBS i DMSO. W przeciwieństwie do tego, myszy leczone MK801 nie polepszyły swoich osiągnięć podczas prób akwizycji i retencji i wykazywały zwiększony czas latencji w retencji w porównaniu ze zwierzętami leczonymi PBS i DMSO. [hasła pokrewne: mastermed białystok, worykonazol, polfarmed ]