Odwrócenie utraty aksonów i niepełnosprawności w mysim modelu postępującej stwardnienia rozsianego ad 5

Nitrowanie tyrozyny białkowej może wynikać z działania peroksynitrytu, który powstaje w wyniku reakcji NO z anionem ponadtlenkowym (41, 42). Jak pokazano na Figurze 3B, podczas gdy obserwowaliśmy intensywne wybarwianie nitrotyrozyną u zwierząt traktowanych podłożem, białkowe nitrowanie tyrozyny było praktycznie nieobecne w rdzeniach kręgowych od myszy leczonych fulerenem ABS-75P. Uszkodzenie oksydacyjne mierzone przez barwienie nitrotyrozyną u zwierząt traktowanych podłożem było związane z nadreaktywnością astrocytów (Figura 3B). Te wyniki pokazują, że leczenie fulerenem ABS-75 blokuje infiltrację CD11b i utleniające uszkodzenie rdzenia kręgowego myszy EAE NOD. Fig. 3 Leczenie ABSuliną ABS-75 zatrzymuje uszkodzenie oksydacyjne, blokuje wytwarzanie CCL2 przez astrocyty i zmniejsza infiltrację CD11b do rdzenia kręgowego wtórnie postępujących myszy EAE. (A) Barwienie CD11b ujawniło dużą liczbę komórek CD11b + infiltrujących kolumnę brzuszną (strzałki) zwierząt kontrolnych, którym podawano nośnik, co było prawie nieobecne u myszy, które otrzymały leczenie fulerenem ABS-75. Oryginalne powiększenie, × 200. Oznaczenie ilościowe potwierdziło zmniejszone komórki CD11b + infiltrujące rdzeń kręgowy u zwierząt leczonych ABS-75y postępującym EAE. P <0,007; Test ucznia, co. SD. (B) Intensywne barwienie nitrotyrozyny (zabarwione na czerwono, białe strzałki) w rdzeniu kręgowym myszy leczonych podłożem po progresji choroby wskazywało na występowanie uszkodzenia oksydacyjnego, które było nieobecne u zwierząt leczonych ABS-75. Obecność hiperreaktywnych astrocytów (GFAP, zielone zabarwione, żółte strzałki) była związana z uszkodzeniem oksydacyjnym u zwierząt traktowanych podłożem. Oryginalne powiększenie, × 200. (C) Barwienie CCL2 wykazało dużą liczbę komórek wyrażających CCL2 w rdzeniu kręgowym zwierząt kontrolnych po progresji choroby, podczas gdy komórki CCL2-pozytywne były praktycznie nieobecne u zwierząt traktowanych fulerenem ABS-75. Oryginalne powiększenie, × 100. (D) Potrójne barwienie przeprowadzone na rdzeniu kręgowym myszy kontrolnych ujawniło wysoką ekspresję CCL2 (zielony) w procesach astrocytarnych (GFAP, pokazane na czerwono) w stanach zapalnych (niebieskie jądra naciekających komórek) istoty białej. To pokazuje, że u zwierząt kontrolnych infiltracja komórek zapalnych jest związana z astrocytową ekspresją CCL2. Oryginalne powiększenie, × 400. Leczenie fulerenem ABS-75 wiąże się ze zmniejszoną ekspresją CCL2 przez astrocyty. Ponieważ CCL2 pochodząca z astrocytów jest główną chemokiną przyciągającą komórki CD11b + do OUN w EAE (43, 44), zbadaliśmy ekspresję CCL2 po leczeniu za pomocą ABS-75. Jak pokazano na figurze 3C, stwierdziliśmy dużą liczbę komórek wykazujących ekspresję CCL2 u zwierząt traktowanych podłożem po progresji choroby. Przeciwnie komórki wykazujące ekspresję CCL2 były praktycznie nieobecne u myszy otrzymujących fuleren ABS-75. Podwójne barwienie w celu określenia, które komórki wyrażały CCL2 ujawniło, że chociaż zdarzały się przypadkowe komórki CD11b, które były CCL2 + (dane nie przedstawione), większość komórek wyrażających CCL2 w rdzeniu kręgowym myszy kontrolnych były astrocytami (Figura 3D). Połączony obraz na Figurze 3D pokazuje kolokalizację komórek wyrażających CCL2 i GFAP. Związek pomiędzy zapaleniem a wytwarzaniem CCL2 przez astrocyty można było zaobserwować w istocie białej kontrolnych myszy, gdzie znaleźliśmy dużą liczbę naciekających komórek (niebieskie jądra) przylegających do proliferujących procesów astrocytowych (GFAP na czerwono) wykazujących wysoce ekspresję CCL2 (Figura 3D). To dalej sugeruje, że u zwierząt kontrolnych infiltracja CD11b jest związana z CCL2 pochodzącym z astrocytów. Następnie przeprowadziliśmy eksperymenty in vitro, aby sprawdzić, czy fuleren ABS-75 działa bezpośrednio na astrocyty, blokując ekspresję CCL2. Pierwotne hodowle astrocytów myszy stymulowano in vitro LPS i IFN-y. w obecności lub nieobecności fulerenu ABS-75 (1. M). Supernatanty zebrano po 24 godzinach i zmierzono dla CCL2 za pomocą testu ELISA. Jak pokazano na Uzupełniającej Figurze 2, LPS / IFN-y leczenie indukowało wytwarzanie CCL2 na pierwotnych astrocytach mysich, które nie były blokowane przez ABS-75. Wyniki te wskazują, że chociaż fuleren ABS-75 nie działa bezpośrednio na astrocyty, leczenie in vivo zmniejsza ekspresję CCL2 przez astrocyty, co wydaje się wyjaśniać zmniejszenie infiltracji CD11b w rdzeniu kręgowym zwierząt traktowanych fulerenem ABS-75a. Fullerene ABS-75 chroni neurony przed urazami oksydacyjnymi i wywołanymi glutaminianem. Ze względu na niezrównoważony metabolizm glutaminianu i wynikający z tego wzrost jego pozakomórkowego stężenia, ekscytotoksyczność wywołana glutaminianem jest uważana za główną przyczynę uszkodzenia aksonów w MS i EAE. W rzeczywistości wykazano, że antagoniści receptora glutaminowego i inhibitory przekazywania glutaminianu skutecznie ograniczają śmierć oligodendrocytów i łagodzą kliniczny EAE (15. 18, 45) [więcej w: galaktyka starachowice, liczne pasma śluzu w moczu, zsr kijany ]