Niezbędna rola cząsteczki rodziny TNF LIGHT jako cytokiny w patogenezie zapalenia wątroby cd

Myszom B6 wstrzyknięto dożylnie 30 mg / kg ConA. We wskazanych punktach czasowych pobierano surowicę od myszy biorcy i mierzono dla rozpuszczalnego stężenia LIGHT za pomocą testu ELISA specyficznego dla LIGHT. (B i C) Myszom B6 wstrzyknięto subletalną dawkę ConA (12,5 mg / kg) osobno (wypełnione kółka, n = 13) lub razem z 20 .g plazmidów kodujących kontrolę pcDNA3.1 (puste kółka, n = 13) , LIGHT typu dzikiego (wypełnione kwadraty, n = 11) lub LIGHT. L (otwarte kwadraty, n = 10) za pomocą hydrodynamicznej techniki iniekcji. Przebadano przeżycie myszy (B) i skrawki wątroby barwione H & E 18 godzin po wstrzyknięciu (C). N, obszar nekrotyczny. * P = 0,3, ** P = 0,033 między grupami według testu log-rank. (D) Myszom BALB / c wstrzyknięto ip 50 .g rozpuszczalnego białka fuzyjnego LIGHT lub kontrolnego białka. Godzinę później myszom wstrzyknięto iv 25 mg / kg ConA, a poziomy ALT w surowicy zmierzono 6 godzin później. Jeden reprezentatywny wynik z 3 niezależnych eksperymentów przedstawiono jako średni. SD. Niezbędna rola LT. R, ale nie HVEM, w prozapalnym działaniu LIGHT. Następnie zajęliśmy się tym, czy HVEM lub LT. R odgrywa odpowiedzialną rolę w zapaleniu wątroby jako funkcjonalny receptor rozpuszczalnego LIGHT. W tym celu wygenerowaliśmy kolejny mutant myszy LIGHT, Y173F, poprzez substytucję pojedynczego aminokwasu Phe dla Tyr173. LIGHT Y173F selektywnie traci wiązanie z HVEM, ale nie z LTR (dodatkowa Figura 3), zgodna z analogicznym mutantem ludzkiego LIGHT (9). Po wstrzyknięciu hydrodynamicznym myszom z subletalną dawką ConA, zapalenie wątroby ILS3F pośredniczyło w poziomie porównywalnym z LIGHT typu dzikiego (Figura 3A), co sugeruje, że HVEM jest nie do zaakceptowania w zapaleniu wątroby z udziałem LIGHT. Figura 3LTR jest niezbędna i wystarczająca dla zapalenia wątroby z udziałem LIGHT. (A) Myszom B6 wstrzyknięto albo pusty wektor albo plazmidowy DNA kodujący mutanta LIGHT lub Y173F dzikiego typu metodą hydrodynamiczną w połączeniu z subletalną dawką ConA (12,5 mg / kg). Poziomy ALT mierzono 18 godzin po wstrzyknięciu. Jeden reprezentatywny wynik z 2 niezależnych eksperymentów przedstawiono jako średni. SD 5 myszy na grupę. (B) Myszom B6 wstrzyknięto dożylnie 30 mg / kg ConA razem ze 100 .g kontrolnej szczurzej Ig (otwarte kółka, n = 12), anty-LT R (wypełnione kółka, n = 10) lub anty- MAb HVEM (wypełnione kwadraty, n = 9). Następnie monitorowano przeżycie. (C) Myszom B6 wstrzyknięto albo pusty wektor albo plazmidowy DNA kodujący LIGHT metodą hydrodynamiczną w połączeniu z subletalną dawką ConA (12,5 mg / kg). Myszy traktowano ip 100 .g wskazanych Abs 2 godziny przed wstrzyknięciem plazmidu. Po 18 godzinach mierzono poziomy ALT w surowicy. Jeden reprezentatywny wynik z 2 niezależnych eksperymentów przedstawiono jako średni. SD 5 myszy na grupę. hIg, kontrola chomika Ig; rIg, kontrola Ig szczura. Aby dodatkowo potwierdzić ten pogląd, wygenerowaliśmy antagonistyczne przeciwciała monoklonalne do LT. R lub HVEM. Nasze przeciwciało anty-LTRR selektywnie blokuje interakcję LIGHT-LT. R, ale nie oddziaływanie LT. -LT. R, podczas gdy mAb anty-HVEM interferuje z interakcją LIGHT-HVEM, ale nie interakcją pomiędzy tłumikiem limfocytów B i T (BTLA) i HVEM (Dodatkowa figura 4). Wstrzyknięcie mAb anty-LTR głęboko zmniejszyło śmiertelność myszy z zapaleniem wątroby indukowanym przez letalną dawkę ConA, podczas gdy anty-HVEM Ab wykazało marginalny wpływ na przeżycie (Figura 3B). Podobnie, w modelu zapalenia wątroby wywołanym przez hydrodynamiczną iniekcję LIGHT z subletalnym traktowaniem ConA, blokada LIGHT-LTAR, ale nie LIGHT-HVEM, powodowała znaczące obniżenie poziomu ALT w surowicy (Figura 3C). Podsumowując, odkrycia te wskazują, że interakcja LIGHT-LT-R jest konieczna i wystarczająca w zapaleniu wątroby z udziałem LIGHT. Istotna rola limfocytów T NK1.1 + w wytwarzaniu rozpuszczalnego LEKKA w zapaleniu wątroby wywołanym ConA. Ponieważ opisano kluczową rolę komórek NK1.1 + (komórki NKT) w patogenezie zapalenia wątroby indukowanego przez ConA (28, 29), następnie zbadaliśmy potencjalną rolę komórek NKT w produkcji rozpuszczalnego LIGHT. Myszy traktowane mAb anty-NK1.1, które niszczą komórki NK i NKT in vivo (30, 31), eksprymują znacząco niższe ilości rozpuszczalnego LIGHT niż myszy kontrolne z kontrolą Ab3 w odpowiedzi na wstrzyknięcie ConA (Figura 4A). W przeciwieństwie do tego, myszy leczone asialo GM1, które zubażają komórki NK, ale nie NKT (29), wytworzyły tyle rozpuszczalnego LIGHT jak te leczone kontrolnym Ab (Figura 4B), co sugeruje kluczową rolę komórek NKT w wytwarzaniu rozpuszczalnego LIGHT. . Z drugiej strony, gdy LIGHT ulegał ekspresji egzogennej przez wstrzyknięcie hydrodynamiczne, myszy pozbawione CD1d pozbawione komórek NKT (32) wykazywały znaczący wzrost poziomu ALT w surowicy (Figura 4C), co wskazuje na zbędną rolę komórek NKT w fazie efektorowej LIGHT- pośredniczył w zapaleniu wątroby
[przypisy: worykonazol, zespół pancoasta, nemak bielsko ]