Niezbędna rola cząsteczki rodziny TNF LIGHT jako cytokiny w patogenezie zapalenia wątroby ad

Aby zbadać potencjalną rolę LIGHT w zapaleniu wątroby, skorzystaliśmy z modelu zapalenia wątroby myszy wywołanego przez wstrzyknięcie konkanawaliny A (ConA) (26). Najpierw zbadaliśmy ekspresję LIGHT i jej receptorów w tym modelu. Analiza Northern blot wykazała, że 1,5. 3 godziny po traktowaniu ConA, ekspresja mRNA LIGHT i HVEM była podwyższona w przeważającej mierze w śledzionie, podczas gdy LT. R konstytucjonalnie wyrażano w wątrobie, niezależnie od traktowania ConA (Figura 1A). Odkrycie to wskazywało na zwiększoną ekspresję LIGHT we wczesnej fazie eksperymentalnego ostrego zapalenia wątroby, prowadząc nas do dalszego badania patogennej roli LIGHT w wątrobie. Ryc. 1. Rola patogenna regulowanego LIGHT w zapaleniu wątroby. (A) Myszom BALB / c wstrzyknięto iv 25 mg / kg ConA. We wskazanych punktach czasowych myszy uśmiercano, a całkowite RNA ekstrahowano z wątroby i śledziony. Ekspresję LIGHT, HVEM, LTyR i GAPDH badano za pomocą analizy Northern blot. (B i C) Myszom z dzikim (puste kółka) i niedoborem LIGHT (wypełnionym kółkom) wstrzyknięto iv 30 mg / kg ConA. Przeżywalność (B) i poziomy ALT w surowicy (C) myszy biorcy były monitorowane. Surowice zebrano 18 godzin po wstrzyknięciu ConA, a poziomy ALT zmierzono jak opisano w Metodach. SF, Sigma-Frankel. * p = 0,003. Stosując myszy z niedoborem LIGHT (7), zbadaliśmy, czy wzrost ekspresji LIGHT był odpowiedzialny za patogenezę zapalenia wątroby wywołanego ConA. Cztery dni po wstrzyknięciu letalnej dawki ConA, 80% kontrolnych myszy C57BL / 6J (B6) zmarło z powodu ostrego zapalenia wątroby (Figura 1B), które charakteryzowało się masywnym naciekiem komórek zapalnych w wątrobie (dane nie pokazane) i podwyższona aminotransferaza alaninowa w surowicy (ALT) (Figura 1C). Przeciwnie, ponad 90% myszy z niedoborem LIGHT przetrwało w nieskończoność ze znacznie niższymi poziomami ALT. Wyniki te wyraźnie wskazują, że ekspresja LIGHT jest kluczowym wydarzeniem dla zainicjowania i / lub progresji indukowanego ConA zapalenia wątroby. Prozapalne funkcje rozpuszczalnego LIGHT jako cytokiny. Aby zbadać mechanizmy leżące u podstaw zapalenia wątroby za pośrednictwem LIGHT, postawiliśmy 3 zasadnicze pytania, którymi należy się zająć. Pierwszą z nich jest to, czy rozpuszczalna postać LIGHT przyczynia się do patogenezy wątroby, ponieważ LIGHT jest odcinany z błony komórkowej przez MMP wraz z bodźcem zapalnym (15, 16). Drugie pytanie dotyczy tego, czy HVEM lub LT. R odpowiada za ten efekt jako funkcjonalny receptor. Trzeci to jak i które komórki wytwarzają LEKKĘ, która pośredniczy w zapaleniu wątroby. Aby odpowiedzieć na pierwsze pytanie, zbadaliśmy, czy rozpuszczalna postać LIGHT jest wykrywalna in vivo po traktowaniu ConA. W teście typu sandwich ELISA specyficznym dla myszy LIGHT, rozpuszczalne LIGHT wykryto w surowicach myszy już po godzinie po traktowaniu ConA, po czym nastąpił gwałtowny spadek po 4 godzinach (Figura 2A), co sugeruje potencjalną rolę rozpuszczalnego LIGHT w patogenezie zapalenie wątroby. Aby to dokładniej ustalić, zaprojektowaliśmy mutanta LIGHT odpornego na cięcie enzymatyczne. LIGHT. L, mutant delecyjny pozbawiony aminokwasów od Leu63 do Asp84, traci zdolność do wytwarzania rozpuszczalnego LIGHT zarówno in vitro po transfekcji do komórek 293T, jak i ekspresji genów in vivo przez wstrzyknięcie hydrodynamiczne (27); raczej preferencyjnie znajduje się na błonie komórkowej (Dodatkowa Figura 1, materiał uzupełniający dostępny online w tym artykule; doi: 10.1172 / JCI27083DS1). Ten mutant nie jest funkcjonalnie upośledzony, ponieważ może on powodować śmierć komórki w komórkach HT-29 w obecności IFN-y. na poziomach podobnych do wymaganych dla LIGHT o pełnej długości (dodatkowa ilustracja 2). W połączeniu z subletalnym traktowaniem ConA, in vivo ekspresja dzikiego typu LIGHT przez wstrzyknięcie hydrodynamiczne spowodowała wysoką śmiertelność myszy biorcy (Figura 2B). Przeciwnie, myszy eksprymujące LIGHT AL przeżyły tak samo jak myszy otrzymujące kontrolne plazmidy wektorowe. Zgodnie z tymi ustaleniami, patologiczne analizy wskazywały, że hepatocyty były w dużej mierze wolne od nekrotycznej śmierci komórek po ekspresji LIGHT. L, podczas gdy były masywne nekrotyczne ogniska hepatocytów po ekspresji LIGHT typu dzikiego (Figura 2C). Ponadto, bezpośrednie podawanie rekombinowanego rozpuszczalnego białka LIGHT znacząco zwiększało poziom ALT w surowicy po 6 godzinach (Figura 2D) i doprowadziło do śmierci wszystkich myszy w ciągu 24 godzin (dane nie pokazane). Reasumując, odkrycia te sugerują, że rozpuszczalne wytwarzanie LIGHT przez rozszczepienie związanej z błoną formy jest kluczowym mechanizmem progresji zapalenia wątroby. Rycina 2 Istotna rola rozpuszczalnej postaci LIGHT w zapaleniu wątroby
[podobne: hipokrates zabrze, bs paslek, pbr wyrzysk ]